Kan örneklerinin nasıl toplanır ve korunur?

Tam kan, toplama koşullarına göre, kozalaklı olmayan ve anti-paçalı kana bölünür. Aynı zamanda, antikoagülasyon ile ayrılmayan üst sarı sıvıya serum denir; Antikoagülasyon ile ayrılan üst sarı sıvıya plazma denir. Örneğin depolama sıcaklığı ve süresi ve serum, plazma ve hücre ayrılmasının yöntem adımları, analizden önce test sonuçlarını etkileyen önemli faktörlerdir. Kan toplamadan sonra, kan hücrelerinin metabolizma nedeniyle bazı besinleri tüketmesi gerekir, bu nedenle bu bileşenleri ölçerken, hücre bileşenlerini ayırmak için zamanında santrifüjlenmeleri gerekir. Kanallama süresi uzunluğu, kan toplama sırasında hastanın pozisyonunun belirlenmesi gibi kan toplamadan önce bireysel hazırlıklar; Turnike uygulama süresi, infüzyon, egzersiz, antikoagülan ve stabilizatör seçimi; Örnek işleme, bazı algılama göstergelerinin seviyesini etkileyecektir. Bu nedenle, örnek toplama işlemi, ön planlama hatalarını azaltmak için standartlaştırılmalıdır.

1. Antikoagülasyon ile serum toplamayın:

1. Kırmızı katkı içermeyen kan toplama tüpü: Kanı pıhtılaşmak için doğal kan pıhtılaşması prensibini kullanır ve serum doğal olarak çökelir ve sonra santrifüjlenir. Esas olarak serum biyokimyası (karaciğer fonksiyonu, böbrek fonksiyonu, miyokard enzimleri, amilaz, vb.) İçin kullanılır (serum potasyum, sodyum, klorür, kalsiyum, fosfor vb.), Tiroid fonksiyonu, ilaç testi, HIV testi, tümör markörleri, Serum bağışıklık bilimi testi.

2. Pıhtılaşma tüpleri ile toplama: Mavi pıhtılaşma tüplerini kullanın. Genel olarak, yarım saat ila 1 saat durmasına izin verilir ve serum doğrudan kullanım veya depolama için santrifüjlenir ve genellikle acil biyokimyada kullanılır.

3. Kan toplama tüplerinin toplanması jel ve pıhtılaştırıcı: kan toplama tüpünün duvarı silikonize edilir ve kan pıhtılaşmasını hızlandırmak ve algılama süresini kısaltmak için bir pıhtılaşan ile kaplanır. Ayrılma jeli PET tüpüne eklenir ve ayırma jeli, gerçekten bir bariyer görevi gören evcil hayvan tüpü ile iyi bir afiniteye sahiptir. Normalde, ayırma jeli, sıradan bir santrifüjde bile kandaki sıvı bileşenini (serum) ve katı bileşeni (kan hücreleri) ayırır. Test tüpünde kapsamlı ayırma ve birikim bir bariyer oluşturur. Santrifüjlemeden sonra serumda, esas olarak serum biyokimyası (karaciğer fonksiyonu, böbrek fonksiyonu, miyokard enzimleri, amilaz, vb.) İçin kullanılan yağ damlacıkları üretilmez (serum potasyum, sodyum, klorür, kalsiyum, fosfor, vb.), Tiroid fonksiyonu, ilaç tespiti, AIDS testi, tümör belirteçleri, serum immünolojisi.

Pıhtılaşma tüplerinin kullanılmasının avantajları:

1. Kırmızı kan hücresi pıhtılaşmasını hızlandırabilir; 2. Serumu etkili bir şekilde ayırmak ve hemolizden daha iyi kaçınmak için ayırma jeli kullanın;

Serum toplama dezavantajları:

1. Kırmızı kan hücrelerinin tam olarak pıhtılaşması gerekir, bu da uzun zaman alır; 2. Serum nispeten küçüktür ve 1 mL tam kan antikoagüle değildir ve sadece 0.2-0.3 ml serum ayrılabilir.

2. Antikoagülan plazma toplanması: Antikoagülan tam kan toplanır, hafifçe ters çevrilmiş, tamamen antikoagülan ve plazma, kullanım veya koruma için doğrudan santrifüj ile ayrılabilir.

Farklı antikoagülanların performans özelliklerine göre, uygun antikoagülan seçilir. Laboratuvarda yaygın olarak kullanılan antikoagülanlar heparin tuzu, etilendiamin tetraasetat ve sodyum sitrattır.

1, heparin antikoagülasyonu: En sık kullanılan antikoagülan, normal koşullar altında ilgili göstergelere müdahale etmeyecektir ve antikoagülasyon oranı büyüktür (antikoagülasyon: tam kan = 1:30), kanın seyreltilmez. Heparin, serin proteazların antitrombin III ile inaktivasyonunu arttıran, böylece trombin oluşumunu önleyen ve trombosit agregasyonu gibi çeşitli antikoagülan etkileri önleyen kuvvetle negatif yüklü bir sülfat grubu içeren bir mukopolisakkarittir. Etki.

Heparin tüpleri genellikle biyokimyasal ve hemorheolojik değişikliklerin tespiti için kullanılır ve elektrolit tespiti için en iyi seçimdir. Test sonuçlarını etkilemek için kan örneklerindeki sodyum iyonları tespit edildiğinde heparin sodyum kullanılmamalıdır. Heparin lökosit agregasyonuna neden olduğu için lökosit sayımı ve sıralama için de kullanılamaz. Antikoagülasyon ile üç heparin tuzu ile elde edilen elektrolit konsantrasyonlarında anlamlı bir fark olmamasına rağmen, lityum heparin en iyisi olarak kabul edildi. Bunun nedeni, heparin sodyumun kan amonyak değerini arttırmak için sodyum değerini ve heparin amonyumunu arttırdığı düşünülür (üreaz yöntemi ile ölçülür). Heparin, kısıtlama enzimleri ve Taq enzimleri gibi moleküler biyolojide yaygın olarak kullanılan bazı araç enzimlerini inhibe edebilir, böylece PCR deneylerinin sonuçlarını etkileyebilir. Bazı yöntemler, heparanaz kullanımı veya lökaferezden sonra tampon 2 veya daha fazla kez yıkama gibi heparinin inhibitör etkisini ortadan kaldırmak için kullanılabilir. Bununla birlikte, birçok deneyci hala heparini moleküler biyoloji deneylerinde antikoagülan olarak kullanmak konusunda isteksizdir.

2, EDTA antikoagülasyonu: Etilen diamin tetraasetik asit bir amino-polikarboksilik asittir, kandaki kalsiyum iyonlarını etkili bir şekilde bağlayabilir. Kalsiyum, reaksiyon bölgesinden kalsiyumu çıkaracak ve endojen veya eksojenleri önleyecek ve sonlandıracaktır. Kan pıhtılaşma sürecinin kaynağı, böylece kan pıhtılaşmasını önleyen, kan hücresi aglutinasyonu ve kan hücresi morfolojisi üzerinde diğer antikoagülanlardan daha az etkiye sahiptir, bu nedenle EDTA tuzları (2K, 3K, 2NA) yaygın olarak antikoagülanlar olarak kullanılır. Genel hematoloji için kullanılır, ancak pıhtılaşma, eser elementler ve PCR için kullanılmaz. EDTA ağır metal iyonlarını şelatladığından, metal iyonları olan bazı makromoleküler enzimler bu antikoagülan kullanılırken büyük bir kayıp olacaktır. Özellikle, müşteri tarafından ölçülen metriklere dayanarak, antikoagülasyon için EDTA'nın kullanılması gerekiyordu.

3. Sodyum sitrat: Sodyum sitrat, kan örneklerinde kalsiyum iyonlarına etki ederek antikoagülan görevi görür. NCCLS, kan için% 3.2 veya% 3.8'lik bir antikoagülan oranını önerir. 1: 9'dur ve esas olarak fibrinolitik sistemde (protrombin süresi, trombin süresi, aktive edilmiş kısmi tromboplastin süresi, fibrinojen) kullanılır. Test sonuçlarının doğruluğunu sağlamak için toplanan kan miktarına dikkat edilmelidir ve kan, örneklemeden hemen sonra 5 ila 8 kez hafifçe ters çevrilmeli ve karıştırılmalıdır. Antikoagülan oranı küçük olduğundan (antikoagülan: tam kan = 1: 9), kan belirli bir seyreltmeye sahiptir ve genellikle önerilmez.

Antikoagülasyon seçimi için önlemler:

1. Her numuneye eklenen antikoagülan miktarı aynı olmalı ve toplanan tam kan miktarı mümkün olduğunca tutarlı olmalıdır.

2. Tüm antikoagüle edilmiş kanın yavaşça tersine döndüğünden emin olun. Kanın bir kısmının antikoagülan temas etmesini ve pıhtılaşmaya neden olmasını önlemek için tam antikoagülasyon

3. Antikoagülan tam kandan daha fazla plazma toplayın (0.4-0.5 mL plazma, 1ML antikoagülant tam kandan ayrılabilir);

4. Toplanan plazma dondurulduktan ve saklandıktan sonra, flokülasyon bulanıklığı çözme işlemi sırasında meydana gelebilir ve gerekirse belirleme için bulanıklığı gidermek için santrifüjlenebilir. Toplamadan sonra, serum ve plazma hiçbir zaman belirlenmez ve hemen dondurulabilir. Sıcaklık ne kadar düşük olursa o kadar iyidir. Sıcaklık ortada tekrarlanmazsa, 1 ay boyunca -20 ° C'nin altında ve 3 ay boyunca -70 ° C'nin altında saklanabilir.

Üç, serum ve plazma toplamak için kullanılan santrifüj hızı: Serum veya plazmayı ayırırken, farklı türlere göre, santrifüj hızı da farklıdır, önerilen santrifüj hızı: 1, fareler: genellikle 1000-1500 rpm, 8 için sentrifüjleme -10 dakika; 2 sıçan, tavşan: genellikle 2000-2500 rpm, 8-10 dakika santrifüjleme; 3, İnsanlar: Genel 2500-3000 rpm, 8-10 dakika santrifüjleme. Dördüncüsü, yüksek lipit ve hemolitik faktörlerin etkisi:

Hemolizin etkisi: Hemolizin test edilen bazı göstergeler üzerindeki etkisi sadece kullanılan yönteme değil, aynı zamanda kullanılan analitik cihaza da bağlıdır. Çift dalga boyu ölçüm yöntemi, hemoglobinin bir dereceye kadar renk etkileşimini ortadan kaldırabilir, ancak hemoglobinin etkileşimini tamamen ortadan kaldıramaz, özellikle hemoglobin kullanılan reaktif ile reaksiyona girdiğinde. Genel olarak, hafif hemoliz çoğu klinik kimya göstergesinin belirlenmesine önemli ölçüde müdahale etmedi.

Şiddetli hemolizin iki etkisi olabilir: (1) Test edilen bileşenin konsantrasyonu PBC'de plazmadan daha yüksek olduğunda, test sonuçları daha yüksektir; (2) RBC'de test edilen fraksiyonun konsantrasyonu plazma etkisinden daha düşük olduğunda, test edilen fraksiyon hafifçe seyreltildi.